一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法:技術背景,發明內容,專利目的,技術

《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》是雲南省騰衝製藥廠於201年8月12日申請的專利。該專利的申請號為2011102300755，公布號為CN102319268A，授權公布日為2012年1月18日，發明人是李筱玲、邵維在、李立華、楊枝時、徐自學。該發明屬於生物製藥技術領域，具體涉及一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑及其製備方法。

該發明提供了一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑及其製備方法。所述的藥物組合物含有重量比3%～6%的蜚蠊提取物，10%～30%聚乙二醇和0.7～1.0%氯化鈉，餘量為注射用水。所述的製備方法包括蜚蠊提取物製備：蜚蠊乾蟲體粉碎成粗粉，經乙醇回流，提取液經減壓濃縮得稠膏；再加純化水使油水分離，收集水層藥液，活性炭吸附，裝柱，正丁醇洗脫，洗脫液經減壓濃縮後進行二次醇提，濾液經減壓濃縮後水提，離心、過濾，脫色、超濾後減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏。藥物注射劑的製備：按組合物配比將蜚蠊提取物、藥用聚乙二醇和藥用氯化鈉混合，調PH值5.4～6.4，用注射用水稀釋至1000毫升，濾過，灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得蜚蠊提取物的注射劑。

2017年12月11日，《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》獲得第十九屆中國專利優秀獎。

（概述圖為《反應杯運載機構及運載方法》摘要附圖）

基本介紹

中文名：一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法
申請公布號：CN102319268A
申請公布日：2012年1月18日
申請號：2011102300755
申請日：201年8月12日
申請人：雲南省騰衝製藥廠
地址：雲南省保山市騰衝縣騰越鎮光華西路下西街61號
發明人：李筱玲、邵維在、李立華、楊枝時、徐自學
Int. Cl.：A61K35/64(2006.01)I、A61K9/08(2006.01)I、A61P9/04(2006.01)I
專利代理機構：昆明知道專利事務所
代理人：姜開俠、朱智華
類型：發明專利

技術背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,權利要求,實施方式,榮譽表彰,

技術背景

蜚蠊，又名美洲大蠊（俗稱蟑螂，）是蜚蠊科中體積最大的，成蟲體長29～35毫米。蜚蠊表皮含有鞏膜質和甲殼質，溴、鋅、鎳、錳、鉀、鈣、鈦、氯、硫、矽、鋁、鎂等元素，肌肉水解可得13種胺基酸，身體內還貯藏著微生素B1、B2、煙酸和抗壞血酸等，淋巴中含海藻糖、海藻糖酶、糖蛋白、肌醇、原兒茶酸葡萄甙等；全體含麥角硫因、龍蝦肌鹼、胡蘆巴鹼、甘氨酸、甜菜鹼、肛鹼、三甲胺、腺嘌呤等。現代科學研究表明，蜚蠊提取物具有很強的生物活性，但是2011年之前的技術對於蜚蠊提取物的套用還存在很大的局限性，蜚蠊提取物套用潛力有待於進一步開發和利用。

發明內容

專利目的

《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》的第一目的在於針對2011年之前的技術的不足，提供一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑；第二目的在於提供一種該注射劑的製備方法。

技術方案

《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》的第一目的是這樣實現的：

所述的注射劑中含有重量比3～6%的蜚蠊醇提取物，10～30%聚乙二醇和0.7～1%氯化鈉，餘量為注射用水。

其最佳化方案，所述的注射劑中含有重量比4～5%的蜚蠊提取物，15～20%聚乙二醇和0.8～1%氯化鈉，餘量為注射用水。所述的聚乙二醇為400型聚乙二醇。

該發明的第二目的是這樣實現的，所述的注射劑的製備方法包括：蜚蠊醇提取物製備：蜚蠊乾蟲體粉碎成粗粉，經5～10倍重量的90～95%乙醇滲漉提取8～12小時，提取液經減壓濃縮得稠膏；再加4～6倍純化水充分攪拌並靜置12～24小時使油水分離，去除沉澱物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1～2小時吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經減壓濃縮後加入8～10倍重量的65～85%乙醇進行二次醇提，冷藏12～24小時後過濾，濾液經減壓濃縮後，再加入8～10倍重量份的純化水進行水提，經冷藏後12～24小時，低溫離心過濾得水提液，水提液用0.1～0.5%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，並加熱至60～80攝氏度後靜止0.5～1小時；經膜過濾器過濾、超濾後減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏；

藥物注射劑的製備：按組合物配比將蜚蠊提取物、藥用聚乙二醇和醫用氯化鈉混合，用注射用水稀釋至1000毫升，濾過，灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得蜚蠊提取物的注射劑。

其最佳化方案，所述的蜚蠊提取物製備中，蜚蠊粗粉加入5～10倍重量比的90～95%乙醇浸漬48～60小時，再用90～95%乙醇作溶劑緩慢滲濾至濾液呈微黃色，濾液經減壓濃縮得稠膏。

所述的蜚蠊提取物製備中離心時的溫度為2～6攝氏度；所述的蜚蠊提取物製備中冷藏溫度為4～8攝氏度；所述的蜚蠊提取物製備中，減壓濃縮溫度為60～80攝氏度；所述的蜚蠊提取物製備中，稠膏的相對密度為1.2～1.3。

改善效果

《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》蜚蠊提取物及其製劑能夠促進心肌細胞Ca2+內流，溫和持久地增加心肌收縮力，擴張血管，降低肺動脈壓、肺毛細血管壓；擴張冠脈、增加冠脈流量，抑制氧自由基介導的心肌損傷；擴張腎血管、增加腎血流量、利尿；改善微循環；糾正神經內分泌失衡。

附圖說明

附圖為《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》注射液的標準指紋圖譜。

附圖

權利要求

1.一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑製備方法，所述的注射劑中含有重量比3～6%的蜚蠊醇提取物，10～30%聚乙二醇和0.7～1%氯化鈉，餘量為注射用水；所述的聚乙二醇為400型聚乙二醇；其特徵在於所述的注射劑的製備方法包括：

蜚蠊醇提取物製備：蜚蠊乾蟲體粉碎成粗粉，經5～10倍重量的90～95%乙醇滲漉提取8～12小時，提取液經減壓濃縮得稠膏；再加4～6倍純化水充分攪拌並靜置12～24小時使油水分離，去除沉澱物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1～2小時吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經減壓濃縮後加入8～10倍重量的65～85%乙醇進行二次醇提，冷藏12～24小時後過濾，濾液經減壓濃縮後，再加入8～10倍重量份的純化水進行水提，經冷藏後12～24小時，低溫離心過濾得水提液，水提液用0.1～0.5%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，並加熱至60～80攝氏度後靜止0.5～1小時；經膜過濾器過濾、超濾後減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏；

2.根據權利要求1所述的注射劑的製備方法，其特徵是：所述的蜚蠊提取物製備中，蜚蠊粗粉加入5～10倍重量比的90～95%乙醇浸漬48～60小時，再用90～95%乙醇作溶劑緩慢滲濾至濾液呈微黃色，濾液經減壓濃縮得稠膏。

3.根據權利要求1所述的注射劑的製備方法，其特徵是：所述的蜚蠊提取物製備中離心時的溫度為2～6攝氏度。

4.根據權利要求1所述的注射劑的製備方法，其特徵是：所述的蜚蠊提取物製備中冷藏溫度為4～8攝氏度。

5.根據權利要求1所述的注射劑的製備方法，其特徵是：所述的蜚蠊提取物製備中，減壓濃縮溫度為60～80攝氏度。

6.根據權利要求1所述的注射劑的製備方法，其特徵是：所述的蜚蠊提取物製備中，稠膏的相對密度為1.2～1.3。

實施方式

下面結合實施例對《一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法》作進一步的說明，但不以任何方式對該發明加以限制，基於該發明教導所作的任何變換，均屬於該發明的保護範圍。

該發明所述的注射劑中含有重量比3～6%的蜚蠊醇提取物，10～30%聚乙二醇和0.7～1%氯化鈉，餘量為注射用水。其優選實施方式，所述的注射劑中含有重量比4～5%的蜚蠊提取物，15～20%聚乙二醇和0.8～1%氯化鈉，餘量為注射用水。所述的聚乙二醇為400型聚乙二醇。

該發明所述的注射劑的製備方法包括：

其優選實施方式，所述的蜚蠊提取物製備中，蜚蠊粗粉加入5～10倍重量比的90～95%乙醇浸漬48～60小時，再用90～95%乙醇作溶劑緩慢滲濾至濾液呈微黃色，濾液經減壓濃縮得稠膏。

實施例1

取蜚蠊乾蟲體1000克粉碎成粗粉，加入5倍重量的90%乙醇浸漬48小時，再以90%的乙醇滲漉提取8小時，提取液在60攝氏度下減壓濃縮得相對密度為1.2～1.3的稠膏；再加4倍純化水充分攪拌並靜置12小時使油水分離，去除沉澱物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1小時吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經減壓濃縮後加入8倍重量的65%乙醇進行二次醇提，在4攝氏度下冷藏12小時後過濾，濾液在60攝氏度下減壓濃縮後，再加入8倍重量份的純化水進行水提，在4攝氏度下冷藏12小時後，在2攝氏度下低溫離心過濾得水提液，水提液用0.1%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，並加熱至60攝氏度後靜止0.5小時；經膜過濾器過濾、超濾後減壓濃縮得相對密度為1.2～1.3的蜚蠊提取物稠膏；

按3%的蜚蠊醇提取物，10%聚乙二醇和0.7%氯化鈉，餘量為注射用水的比例配合，經濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。

實施例2

蜚蠊乾蟲體粉碎成粗粉1000克，加入10倍重量的95%乙醇浸漬60小時，然後再用95%回流提取12小時，提取液在80攝氏度下減壓濃縮得相對密度為1.2～1.3的稠膏；再加6倍純化水充分攪拌並靜置24小時使油水分離，去除沉澱物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置2小時吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液在80攝氏度下減壓濃縮後加入0倍重量的85%乙醇進行二次醇提，在8攝氏度下冷藏24小時後過濾，濾液在80攝氏度下減壓濃縮後，再加入10倍重量份的純化水進行水提，在8攝氏度下冷藏24小時後，在6攝氏度下低溫離心過濾得水提液，水提液用0.5%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，並加熱至80攝氏度後靜止1小時；經膜過濾器過濾、超濾後減壓濃縮得相對密度為1.2～1.3的蜚蠊提取物稠膏；

按6%的蜚蠊醇提取物，30%聚乙二醇和1.0%氯化鈉，餘量為注射用水的比例配合，經濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。

實施例3

蜚蠊乾蟲體粉碎成粗粉1000克，經8倍重量的95%乙醇浸漬55小時，然後再用95%回流提取10小時，提取液在70攝氏度下減壓濃縮得相對密度為1.2～1.3的稠膏；再加5倍純化水充分攪拌並靜置18小時使油水分離，去除沉澱物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1.5小時吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液在70攝氏度下減壓濃縮後加入9倍重量的75%乙醇進行二次醇提，在6攝氏度下冷藏18小時後過濾，濾液在70攝氏度下減壓濃縮後，再加入9倍重量份的純化水進行水提，在6攝氏度下冷藏18小時後，在4攝氏度下低溫離心過濾得水提液，水提液用0.3%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，並加熱至70攝氏度後靜止0.7小時；經膜過濾器過濾、超濾後減壓濃縮得相對密度為1.2～1.3的蜚蠊提取物稠膏；

按5%的蜚蠊醇提取物，20%聚乙二醇和0.8%氯化鈉，餘量為注射用水的比例配合，經濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。

實施例4

用實施例1中製備的蜚蠊提取物稠膏，按4%的蜚蠊提取物，15%的聚乙二醇和0.8%的氯化鈉，餘量為注射用水，經濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。

實施例5

用實施例1中製備的蜚蠊提取物稠膏，按5%的蜚蠊提取物，20%聚乙二醇和1.0%氯化鈉，餘量為注射用水，經濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。

該發明的注射劑為黃色澄明液體，按以下方法對注射液和蜚蠊提取物進行鑑別、檢查和測定：

1、鑑別

（1）薄層色譜法試驗：

取注射劑1毫升，加水稀釋至5毫升，作為供試品溶液。取蜚蠊乾品1克，加正丁醇-冰醋酸（4：1）混合液50毫升，超聲處理30分鐘後過濾，將濾液蒸乾，殘渣加水1毫升溶解，作為藥材對照溶液。

依照薄層色譜法（《中國藥典》一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）混合液展開，取出，晾乾，置紫外光燈（254納米）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應的位置上，應顯3個相同顏色的斑點。再噴以2%的茚三酮溶液，105攝氏度下加熱至斑點顯色清晰，在與對照藥材色譜相應的位置上，應顯1個相同顏色的斑點。

（2）高效液相色譜法試驗：

取注射劑1毫升，加水稀釋至5毫升，通過強鹼性陰離子交換葡聚糖層析柱（QAE-SephadexA-25型，內徑1.5厘米，柱高5厘米），用20毫升水洗脫，棄去水洗脫液，再用0.02摩爾/升鹽酸洗脫，棄去初洗脫液8毫升，收集續洗脫液20毫升，作為供試品溶液。依照高效液相色譜法（《中國藥典》一部附錄ⅥD）試驗，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，色譜柱（柱長150毫米，柱內徑為4.6毫米）；以0.05摩爾/升醋酸鈉緩衝液（pH5.0）-甲醇（90：10）混合液為流動相，用二極體陣列檢測器（DAD）進行檢測，檢測波長為246納米，流速為每分鐘0.5毫升，柱溫為30攝氏度。精密吸取供試品溶液5微升，注入液相色譜儀，測定，記錄12分鐘內的色譜圖。供試品色譜圖中主峰（最大峰面積）的DAD紫外檢測光譜圖在246納米與286納米的波長處有最大吸收。

2、檢查

色澤：取該品1毫升，加水至10毫升，搖勻，依照《中國藥典》一部附錄ⅪA第一法進行檢查，與黃色8號標準比色液比較，不得更深；pH值：應為5.4～6.4（《中國藥典》一部附錄ⅦG）；蛋白質：取注射劑1毫升，加入新鮮配製的30％磺基水楊酸溶液1毫升，混勻，放置5分鐘，不得出現渾濁；樹脂：取注射劑5毫升，加鹽酸1滴，放置30分鐘，應無樹脂狀物析出；草酸鹽：取注射劑2毫升，加3%氯化鈣試液2～3滴，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉澱；鉀離子：取注射劑2毫升，先用小火熾灼至炭化，再在500～600攝氏度熾灼至完全灰化，加入6%醋酸使溶解。置25毫升量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，量取1毫升置於10毫升納氏比色管中，加鹼性甲醛溶液（甲醛溶液用0.1摩爾/升氫氧化鈉溶液調pH至8.0～9.0）12滴，3%的乙二胺四醋酸鈉溶液2滴，3%的四苯硼酸鈉溶液0.5毫升，加水至10毫升作為供試品管。取硫酸鉀適量研細，於110攝氏度乾燥至恆重，精密稱取2.330克，加水適量使溶解成1000毫升，精密吸取10毫升加水稀釋成100毫升，即得標準鉀離子溶液；取標準鉀離子溶液（100微克/毫升）0.8毫升，置於10毫升納氏比色管中，同上操作作為對照品管，取供試品管和對照品管進行目測比濁，供試品管不得更渾濁；重金屬：取注射劑2毫升，依照《中國藥典》一部附錄ⅨE第二法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；砷鹽：取注射劑1.0毫升，緩緩加熱炭化，如炭化不完全，加少量硫酸潤濕後，緩緩加熱使完全炭化，再於500～600攝氏度熾灼灰化，放冷，加鹽酸5毫升，加水23毫升，依照《中國藥典》一部附錄ⅨF第一法檢查，應符合規定的0.0002%；熱原：取注射劑依照《中國藥典》一部附錄ⅩⅢA檢查，劑量按家兔體重每千克注射1毫升，其結果應符合規定；異常毒性：取注射劑，每1毫升中加入氯化鈉注射液稀釋至10毫升，依照《中國藥典》二部附錄ⅪC檢查，按靜脈注射給藥，其結果應符合規定。

3、過敏試驗

供試液製備：取注射劑，每1毫升加氯化鈉注射液稀釋至4毫升作為供試品。

取體重250～350克健康豚鼠6隻，隔日每隻每次腹腔注射供試品0.5毫升，共3次，進行致敏。然後將其均分為2組，每組3隻，分別在首次注射後14日及21日，由靜脈注射供試品1毫升進行攻擊。在注射後30分鐘內，不得出現過敏反應。如有豎毛、噴嚏、乾嘔、連續咳嗽3聲和呼吸困難等現象中的2種或2種以上，或出現抽搐、休克、死亡現象之一者，則判定供試品不符合規定。

溶血與凝聚試驗：

先配製2%的紅細胞混懸液。取家兔血數毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液，加10倍量的生理氯化鈉溶液，搖勻，離心，除去上清夜，沉澱的紅細胞再生理氯化鈉溶液洗滌2～3次，至上清液不顯紅色為止；將所得的紅細胞用生理氯化鈉溶液配製成2%的紅細胞混懸液，即得。

進行試驗。取潔淨試管5支，編號，1～3號管為供試品管，4號管為陰性對照管，5號管為陽性對照管；按下表所示依次加入2%的紅細胞混懸液、生理氯化鈉溶液、蒸餾水、供試注射液，混均後，立即置於37攝氏度的恆溫水浴中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時後，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時。

試管編號	1	2	3	4	5
2%紅細胞混懸液（毫升）	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5
生理氯化鈉溶液（毫升）	2.2	2.2	2.2	2.2	-
蒸餾水（毫升）	-	-	-	-	2.5
供試注射液（毫升）	0.3	0.3	0.3	0.0	0.0

按上法檢查，供試注射液在3小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚。

指紋圖譜：取注射液1毫升，加水稀釋至5毫升，通過強鹼性陰離子交換樹脂層析柱（Dowex2、Cl¯型，200目，內徑1.5厘米，高2.5厘米，濕法裝柱，層析柱預處理採用0.5摩爾/升氫氧化鈉溶液10毫升洗脫，再用水10毫升洗脫，備用），用水10毫升洗脫，棄去水洗脫液，再用0.25摩爾/升醋酸溶液洗脫，棄去初洗脫液5毫升,收集續洗脫液25毫升，搖勻，作為供試品溶液。取肌苷對照品適量，精密稱定，加水配製成每1毫升含肌苷50微克的溶液，作為對照品溶液。依照《中國藥典》一部附錄ⅥD的高效液相色譜法測定，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，色譜柱（柱長150毫米，柱內徑為4.6毫米）；梯度洗脫，以0.05摩爾/升醋酸鈉緩衝液（pH5.0）為流動相A，以甲醇為流動相B，檢測波長為254納米，流速為每分鐘0.6毫升，柱溫為30攝氏度。理論板數按肌苷峰計算應不低於5000。

時間（分鐘）	流動相A（%）	流動相B（%）
0~5	90	10
5~15	90→74	10→26
15~18	74	26

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5微升，注入液相色譜儀，記錄25分鐘內的色譜圖。供試品色譜圖應與標準指紋圖譜基本一致。將供試品色譜圖導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2004，1.0B版），與標準指紋圖譜相比較，計算相似度。相似度應不低於0.90。

4、蜚蠊提取物中有效成份含量測定

複合核苷鹼基的測定：精密量取蜚蠊提取物1毫升，置50毫升量瓶中，用甘氨酸-鹽酸緩衝液溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5毫升置100毫升量瓶中，加上述緩衝液至刻度，搖勻，即得供試品溶液。依照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》一部附錄VA），在254納米波長處測定吸收度，按下式計算每毫升蜚蠊提取物注射劑的複合核苷鹼基含量C（毫克）。

式中：A為供試品溶液吸收度，490為蜚蠊提取物中複合核苷鹼基類濃度為1％時在254納米波長處的平均吸收度，n為稀釋倍數。測定結果為蜚蠊提取物每1毫升中含複合核苷鹼基應為10.0毫克～18.0毫克。

一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑的製備方法