《一種新的脂肪細胞生長因子的分離鑑定和功能研究》是依託四川大學，由田衛東擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：一種新的脂肪細胞生長因子的分離鑑定和功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：田衛東
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
脂肪幹細胞具有自我更新和多向分化潛能，而且來源廣泛，取材方便，獲取幹細胞量大，易於分離純化，供區損傷微小，已成為組織工程及再生醫學領域國內外研究的熱點，以脂肪幹細胞為種子細胞構建組織工程脂肪，將是修復機體軟組織畸形缺損的新方法。迄今，對於體內啟動脂肪幹細胞定向成脂分化的關鍵因子還未能尋獲，對調控細胞成脂分化的確切機制還缺乏深入的研究。本課題組在前期研究工作中發現脂肪組織中存在一種促進脂肪幹細胞定向成脂分化的小分子多肽，初步的研究證實極有可能是一種新的脂肪細胞生長因子。本項目擬採用高效液相色譜，二維蛋白質凝膠電泳等蛋白質組學的關鍵技術和方法，分離純化這種新的脂肪細胞生長因子，並運用生物信息學策略初步預測其結構和功能，通過基因轉染等技術探討脂肪幹細胞定向成脂分化的基本分子機制，為脂肪組織工程構建奠定實驗基礎，以期建立對機體軟組織畸形缺損進行功能和結構修復重建的新技術。
結題摘要
幹細胞向成熟的脂肪細胞分化受到多種因子的精密調控，控制幹細胞的分化也是幹細胞套用於脂肪組織工程的關鍵限制因素之一。本課題組前期發現離體的脂肪組織所形成的微環境對脂肪幹細胞的成脂分化具有重要的調控作用，並未見報導。本研究採用磁激活細胞分選和螢光激活流式細胞分類相結合的方法從脂肪血管基質中富集了Lin-:CD271+:Sca-1+的脂肪幹細胞亞群；採用超濾離心富集並利用LC-ESI-MS/MS技術鑑定了脂肪組織條件培養液中的蛋白成分；將脂肪幹細胞(ASCs)複合纖維蛋白、明膠海綿及富血小板血漿(PRP)等多種生物支架材料進行了體內實驗；套用AdMax腺病毒載體系統構建小鼠EFP-PPARγ2 融合表達的重組腺病毒。結果表明我們所分離到的脂肪幹細胞亞群具有較強的自我更新能力和多向分化的潛能；脂肪組織條件培養液對脂肪幹細胞的成脂分化有顯著的促進作用，其中Ceruloplasmin、Ig gamma-2A、Collagen alpha-1 (I)等若干候選蛋白可能是影響ASCs成脂分化的關鍵蛋白因子；利用ASCs複合多種生物支架材料實現了一定程度的脂肪組織再生；含小鼠EGFP-PPARγ2的Ad5腺病毒載體經Western Blot和轉染後細胞的免疫螢光鑑定證明了載體的成功構建。本課題的研究結果豐富了脂肪組織成脂分化微環境的調控機制，並為構建組織工程脂肪提供了新的思路。
