《Ⅱ組冠狀病毒NSP1內保守序列LLRKxGxKG與病毒致病力的關係研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由林磊擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Ⅱ組冠狀病毒NSP1內保守序列LLRKxGxKG與病毒致病力的關係研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：林磊
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
冠狀病毒可引起人和動物的多種疾病，其中以Ⅱ組冠狀病毒危害最為嚴重，可引起SARS等嚴重傳染病。因此開展Ⅱ組冠狀病毒致病機制的研究具有重要意義。但SARS-CoV相關研究受到嚴格限制，在這種情況下，與SARS-CoV同屬Ⅱ組冠狀病毒且對人不致病的MHV就成為很好的研究模式株。配對分析發現，MHV和SARS-CoV非結構蛋白1中有一段高度保守的胺基酸序列（LLRKxGxKG）。早期實驗結果顯示：LLRKxGxKG序列缺失後，MHV突變體對小鼠的致死率大大降低。本研究擬通過分析LLRKxGxKG序列缺失對NSP1蛋白功能的影響，同時檢測MHV突變體的複製力、致病力和組織嗜性等方面的變化，從分子、細胞和動物三級水平上揭示Ⅱ組冠狀病毒NSP1內保守序列LLRKxGxKG與病毒致病性的關係，以期加深我們對Ⅱ組冠狀病毒致病機制的了解，為抗病毒藥物的設計和新型減毒疫苗的研製提供參考。
結題摘要
冠狀病毒是一大類可以導致人類和家畜染病的人畜共患病病原體，也是迄今為止基因組最大的單股正鏈RNA病毒。有報導指出，冠狀病毒的非結構蛋白1（NSP1）在病毒的致病機制中扮演重要角色，為深入了解冠狀病毒NSP1的功能特點，本研究以與人類關係最為密切的II組冠狀病毒為切入點，以該組的代表株Mouse Hepatitis Virus A-59（簡稱MHV A-59）的NSP1中一段高度保守的胺基酸序列(LLRKxGxKG)為研究靶點，利用基於痘苗病毒載體的冠狀病毒反向遺傳學系統，構建了不含此段胺基酸序列的缺失突變體MHV-nsp1-Δ27，結果顯示，在細胞水平上，雖然缺失突變體MHV-nsp1-Δ27與野生型MHV-A59具有相似的病毒生長曲線，但在動物水平上，缺失突變體的致病力顯著降低，同時，免疫缺失突變體的小鼠能夠抵禦野生型病毒的致死性攻擊，為進一步分析保守序列在突變病毒減毒機制中的作用，分別構建了NSP1蛋白和缺失LLRKxGxKG序列的突變蛋白NSP1-Δ27的真核表達質粒，通過與報告基因質粒共轉染等方式，檢測NSP1蛋白對其他蛋白的干擾能力，結果顯示，NSP1蛋白能夠高效的抑制宿主細胞干擾素的生成；缺失保守序列的NSP1蛋白干擾其他蛋白合成的能力大大降低。因此，體內和體外的實驗結果均證明保守序列LLRKxGxKG是一個重要的毒力位點。
